癌癥，是人類內心深處最恐懼的存在，原因就在于，絕大多數癌癥都沒有行之有效的治療方法，而這也是人們將癌癥稱為“絕癥”的主要原因。不過，隨著再生醫學，特別是細胞免疫療法的問世，似乎為癌癥治療探尋到一條新的道路，讓無數癌癥患者歡欣鼓舞。

　　再生醫學網獲悉，近日，由PACT Pharma的Stefanie J.Mandl和Susan P.Foy，以及加州大學洛杉磯分校的Antoni Ribas領銜的研究團隊完成了一項壯舉！

　　他們使用CRISPR/Cas9基因編輯系統，在T細胞中插入了能夠識別腫瘤特異性新抗原的T細胞受體（neoTCR）基因，構建了neoTCR-T細胞。首個1期臨床數據表明，neoTCR-T細胞治療安全性良好，可以在一定程度上控制難治性腫瘤的生長。

　　據了解，這是全球范圍內首次通過CRISPR基因編輯技術在T細胞中插入基因，以達到個性化抗癌的目的。這一重磅研究成果發表在頂級期刊《自然》上。

　　在該研究中，研究人員對總計187名接受登記的志愿者進行了樣本提取，排除掉存在組織和外周血取樣失敗等原因的志愿者之后，剩余的88例患者進入到了neoTCR的鑒定與發現階段。

　　經過進一步地篩選（排除掉TCR分離失敗以及TCR不符合產品選擇標準的患者），共計46名患者滿足neoTCR篩選標準。最后，研究人員對28名患者進行了血液單采，并對其中的16名難治性實體瘤患者（包括結直腸癌、乳腺癌和肺癌）進行了neoTCR-T治療。

　　總的來說，neoTCR-T治療的過程可分為兩個步驟：①篩選和鑒定腫瘤特異性新抗原（neoTCR）；②提取、改造以及回輸T細胞。

　　首先，研究人員對16名患者的活檢標本進行了WES和RNA-seq分析，通過與參考基因組比對，鑒定出了31個到488個不等（中位數為102個）的錯義體細胞突變，以及20個到236個不等（中位數為35個）的表達突變。

　　然后，結合PACT Pharma公司專有的生物信息學算法，研究人員對可能被T細胞識別的新抗原肽-HLA復合體結構進行了預測和優先級排序。

　　通過將上述步驟中篩選得到的新抗原肽與β2微球蛋白（HLA分子的輕鏈結構域）及HLA重鏈蛋白進行融合表達，研究人員生成了能夠模擬天然抗原-HLA復合物的三聚體靶標蛋白。隨后，通過對這些三聚體單鏈蛋白進行條碼標記（為了后續的單細胞分析）、熒光標記以及多聚化，研究人員針對每名患者生成了一個新抗原-HLA靶標文庫（數量從459個到262個不等，中位數為104個）。

　　為了驗證文庫中新抗原肽的有效性，研究人員進行了進一步的實驗。具體來說，研究人員從患者外周血中提取CD8+T細胞，并將其與上述構建的新抗原-HLA文庫共孵育，再使用超靈敏、高通量的納米顆粒分離技術進行分析，最終驗證了共計84個新抗原肽的有效性。

　　在篩選到合適的新抗原作用靶標后，研究人員就要改造T細胞了。他們采用電穿孔的轉染方法，將Cas9蛋白和sgRNA直接導入由患者血液分離出的T細胞中。

　　在這一步，sgRNA能夠一次性引導Cas9完成兩步操作：①將T細胞內源性的TCR基因（負責編碼TCR蛋白α鏈的TRAC基因和編碼β鏈的TRBC基因）敲除掉；②將針對每位患者所挑選出來的最多三個neoTCR基因（上述新抗原肽驗證階段中效果最佳的候選TCR）插入到TRAC基因位點。

　　在臨床研究階段，研究人員采用了三個劑量梯度的neoTCR-T細胞進行回輸治療，并對其中兩個劑量水平設置了額外進行IL-2處理對照組（IL-2可提高T細胞活性并促進其生長）。

　　結果表明，經回輸治療后，患者外周血中neoTCR細胞占比升高，且這種升高水平存在劑量效應。另外，接受額外IL-2治療的患者，體內neoTCR的比例顯著高于未進行IL-2治療的患者，這表明，聯合使用IL-2可能是提高neoTCR-T療效的有效手段。

　　為了證明改造后的neoTCR-T細胞能夠有效運輸到腫瘤組織，研究人員對患者活檢組織中neoTCR的互補決定區3（CDR3）序列進行了定量分析，結果表明，多名患者腫瘤部位的neoTCR比例均得到顯著提高，其頻率均高于回輸治療之前天然TCR的水平。

　　最后，研究人員對TCR-T治療的毒性和療效進行了綜合分析。研究結果表明，一例患者出現了1級細胞因子釋放綜合征，一例出現了3級腦炎的癥狀，所有患者都產生了淋巴細胞消耗所導致的預期副作用。

　　從療效來看，5名患者的病情穩定，余下11名患者疾病進展。另外，16名患者中有兩名患者的腫瘤尺寸變小。

　　若要說哪項醫學技術最具“魔幻性”，那肯定非基因編輯技術莫屬！作為一種新興的醫療技術，基因編輯展現出驚人實力，為無數惡性疾病與遺傳疾病提供了新的治療思路與方法。對此，再生醫學網表示，隨著該項研究成果問世，相信將徹底顛覆癌癥治療史。